Diabetologia：激活但功能受损的遗忘Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常借助于现呼吸道自身突变到经常借助于现1HG癌症病理病症的成效不下在儿童时期就有较好的揭示，多个呼吸道自身突变之前性的儿童之前有70%在肝脏转换后10年内患有癌症，而随访15年的儿童这一倍数增高到84%。远比之下，占病理1HG癌症一半以上的HG1HG癌症的发作选择性还没有人赢取充分的研究工作。

愈加多的人开始用于分期的系统来表述1HG癌症的成效：形态在经常借助于现多种呼吸道自身突变时转入第1过渡期，经常借助于现血压异常时转入第2过渡期，经常借助于现病症时转入第3过渡期。一些多发呼吸道自身突变之前性的形态，在1期和2期，成效较很慢，并发展为发作的1HG癌症。我们之前揭示了举例来说在首次侦测到多种呼吸道自身突变样品后至更少10年无癌症的却是很慢成效者，这第三组症状伤亡人数更少，但原则上特征非常明确。随后，我们发现呼吸道自身特异性特异性CD8+T巨噬细胞反应在成效平稳的症状之前原则上不实际上，但在近期发作和长时间实际上的癌症症状之前很较难侦测到。这确实暗示，与成效症状远比，这些症状神经性反应的调节减很慢。

晚期研究工作暗示，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但癌症症状实际上一些特性缺陷，其之前包含对IL-2的反应能力减缓。此外，癌症症状之前的effectCD4+T巨噬细胞确实对调节格外具抵抗性，表现为effectT巨噬细胞的依赖性消散，自然导致的Treg和棒状外导致的游离Treg，以及特异性年中的CD4+T巨噬细胞之前IL-2反应消散。本研究工作的用以是揭示了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在这群人却是平稳成效者之前的原则上特征，他们的平均年龄第三组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁都有胃癌的症状亲属之前体检1HG癌症的危险原因。我们之前揭示了长时间平稳成效者的原则上特征，他们保持多重呼吸道自身突变之前性超过10年，但没有人经常借助于现癌症的病理病症，很慢性或非顺利完成性神经性。随后，10名之后保持无癌症并愿意包括大量肝脏样品的平稳成效者纳入T和B巨噬细胞特性统计分析。在目前的研究工作之前，8名很慢成效者(SP第三组)，之前位年龄第三组43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的呼吸道自身突变之前性。所有的参与者都始终保持1HG癌症成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身突变对某些特异性的之前性反应，然而，一名症状已经始终保持2期至更少6年，但没有人经常借助于现病理病症，一名症状被病人为癌症，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该NADPH顺利完成了单独审计。受控外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，运用于多常量流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞依赖性试验审计NADPH之前Treg的高频不下、表HG和特性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和重回)顺利完成无监督聚类统计分析，审计Treg表HG。

结果：与肥胖症NADPH远比，来自很慢成效棒状的潜意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，应答的潜意识CD4+ Treg高频不下增高，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)表达借助于来增高有关。一名HbA1c增高的症状与成效平稳者和匹配的准确不下远比，Treg谱各有并不相同。特性统计分析暗示，与肥胖症NADPH远比，来自平稳成效棒状的Treg介导的CD4+effectT巨噬细胞依赖性明显受损。表现为对effectCD4+T巨噬细胞CD25和CD134表达借助于来的依赖性增高。

平面图1 熟悉的表HG统计分析推断，CD4+Treg亚HG在很慢成效队列之前增高。由FlowSOM转化的Treg一楼，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示借助于物表达借助于来确认借助于10个元簇:潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;本站程Treg_1;本站程Treg_2;本站程Treg_3;和本站程Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg标示借助于转化的10个元簇的MST。每个链表亦然一个战斗群(100个战斗群)，格外大的元战斗群(10个元战斗群)在链表第三组周围成品。每个链表之前的饼平面图说明单个标示借助于的表达借助于来层次。(b)每个元聚类的热平面图，以推断连续性标示借助于表达借助于来。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化平面图，以及FlowSOM识别的系统的每个元簇的沙质。(e-l)相较同位素为每个metacluster箱内本站平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:本站程Treg_2 (e),本站程Treg_3 (f),本站程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T巨噬细胞(l)。橘色圆圈亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模HG属实，Treg高频不下的增高是成效平稳的标志。分级旁路(a - f)和柑橘统计分析(g-k)较为SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR表达借助于来顺利完成受控，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第三组以及NADPHSP 606(橘色)之前CD25+ cd127的高频不下概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路集合的箱内本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(本站程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(本站程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(本站程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+本站程T cell)。(g - i)棉花簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达借助于来气压着色，箭头突借助于的簇被识别的系统为SP和HD队列相互间的并不相同。(j)箱内本站平面图推断了在SP(杂色)和HD(灰点)第三组之前，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相较同位素(倍数)。(k)直方平面图推断每个簇的表HG(粉红色)和Treg标示借助于相较表达借助于来与文化背景表达借助于来(紫色);上列，本站程Treg_3;下面一行，本站程Treg_4。文化背景与所有其他簇之前标示借助于的表达借助于来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验

平面图3 与肥胖症献血者远比，成效平稳者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T巨噬细胞元簇(潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;本站程Treg_2;本站程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表达借助于来标示借助于的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达借助于来热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达借助于来联接，推断直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NADPH包含，p< 0.05(紫色)NADPHSP 606和匹配的HD不包含在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表达借助于来，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)联接，推断直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检验

平面图4 来自平稳成效的CD4+ treg巨噬细胞控制effectCD4+T巨噬细胞的能力减缓。SP第三组用紫色的本站和圆圈说明，HD第三组用黄色的本站和圆圈说明，橘色的本站/圆圈说明NADPHsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示借助于为CFSE, Treg按观察的倍数氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，指导3当晚顺利完成流式巨噬细胞法术侦测。(a-d)与CD4+需要的话者相较应的treg指导(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。用于之前性折衷(应答的响应巨噬细胞包含treg)计数依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

平面图5 effectCD4+T巨噬细胞对平稳成效的T巨噬细胞重置的依赖性格外敏感。SP第三组用紫色的本站和圆圈说明，HD第三组用黄色的本站和圆圈说明，橘色的本站/圆圈说明NADPHsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示借助于，treg按观察的倍数氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，指导3当晚顺利完成流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬细胞因三子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分不下(b)。(c,d) CD25依赖性百分不下(c)和CD134依赖性百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之前的表达借助于来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论证：我们得借助于论证的论证是，来自平稳成效三子的重置潜意识CD4+Treg在GITR表达借助于来之前赢取了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1HG癌症风险形态之前的值得注意的必要性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28